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        说说洗涤在ELISA试剂盒过程中的作用
        发布时间:2021-11-16   点击次数:229次
          在进行酶联免疫吸附剂测定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)实验中,有很多需要注意的地方,由于ELISA方法广泛应用在各种抗原和抗体的此定中。但是测定中的影响因素很多,并且对操作有较高的要求,所以,在实验中除了正常的相互反应,还会出现错误的反应,导致错误的结果。
          洗涤在ELISA试剂盒过程中虽不是一个反应步骤,但却决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗涤时应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中,洗涤是最主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,操作者应严格按要求洗涤,不得马虎。
          洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的,非离子型洗涤剂既含疏水基团,也含亲水基团,其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合,从而削弱蛋白质与固相载体的结合,并借助于亲水基团和水分子的结合作用,使蛋白质回复到水溶液状态,从而脱离固相载体。洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温20,其浓度可在0.05%-0.2%之间,高于0.2%时,可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。
          洗板时注意各种试剂盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀释,应按要求稀释,所用的水电导率最好在1.5us/cm之下,洗液如果结晶应待其融解后配制。保证洗板浸泡时间为40秒左右,孔内液体被洗板机吸收得越干净洗涤效果更好,手工洗板防止洗液在孔内形成气泡。
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